除了两位水管工兄弟,游戏中的经典角色也在电影中亮相。碧姬公主作为蘑菇王国意志坚定的统治者,在片中对马力欧进行了严酷的作战训练,以帮助后者挖掘自身潜力。喜剧演员杰克·布莱克、塞斯·罗根则为片中的大反派酷霸,以及“搞笑担当”大猩猩咚奇刚配音。值得一提的还有,为游戏中的马力欧和路易吉兄弟配音长达三十余年的查尔斯·马丁内斯,也在片中友情客串。黄晓娟大家并不陌生了,是小品演员,也是二人转演员,国家一级演员,春晚常客,曾在电视剧《最美逆行者》中饰演了涂妈妈,虽然是妈妈角色但给人印象深刻。与萨日娜、奚美娟、张凯丽等人一样,都是大家比较喜欢的妈妈角色饰演者。